Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego ad 7

Pomimo jedynie 2-krotnego wzrostu aktywności PGIS, myszy eksprymujące PGIS narażone na przewlekłe niedotlenienie nie wykazały żadnych dowodów na nadciśnienie płucne i miały RVSP, który był o 60% niższy niż u ich nietransgenicznych matek. RVSP dla transgenicznych zwierząt nie zmieniła się od linii podstawowej po 5 tygodniach przewlekłego niedotlenienia. Ponadto, grubość ścianek naczyń od małych do średnich tętnic była około jedna trzecia cieńsza u myszy z ekspresją PGIS po przewlekłym niedotlenieniu i była nie do odróżnienia od myszy kontrolnych o małej wysokości, wykazując, że nie nastąpiła przebudowa naczyń u transgenicznych zwierząt. Efekt dozowania genów może być obecny, chociaż nasza linia o niższej ekspresji (linia 7), z 47% wzrostem 6-keto PGF1. produkcji, nie był chroniony przed rozwojem nadciśnienia płucnego po ekspozycji na przewlekłe niedotlenienie. Read more „Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego ad 7”

Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego ad 6

W tej linii zwierzęta Tg + (n = 4) rozwinęły podwyższone RVSP w podobnym stopniu jak Tg. mioty (n = 3) (35,3. 4,9 mmHg vs. 40,5. 2,8 mmHg; P = 0,44, ns). Read more „Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego ad 6”

Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego ad 5

Aktywność enzymu PGIS jest zwiększona u zwierząt transgenicznych. W celu określenia, czy podwyższone poziomy funkcjonalnej aktywności PGIS wystąpiły u transgenicznych zwierząt, przeprowadzono test aktywności enzymu PGIS. Poziomy tkankowe płuc stabilnego metabolitu PGI2 6-keto PGF1. zmierzono na kodowanych próbkach po inkubacji tkanki płuc z AA. Stwierdziliśmy, że zwierzęta Tg + w linii 9 wytwarzają prawie dwa razy więcej 6-keto PGF1. Read more „Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego ad 5”

Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego czesc 4

Po uśmierceniu zwierząt pobrano 0,2 ml krwi w drodze przebicia komorowego i heparynizowano. Hematocrit z wirowaniem mierzono za pomocą rurki kapilarnej i standardowych technik. Testy przeprowadzono w dwóch egzemplarzach dla każdego zwierzęcia i zastosowano średnią. Histologia i morfometria. Tkanka płuca, przetworzona w sposób opisany tutaj, została utrwalona w formalinie i zatopiona w parafinie. Read more „Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego czesc 4”

Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego cd

Kleksy suszono powietrzem i pieczono. Hybrydyzację przeprowadzono stosując znakowaną 32P sondę produktu o wielkości 400 bp małego intronu T SV-40 wytworzonego z opisanych tutaj starterów, przy użyciu ExpressHyb (CLONTECH Laboratories Inc.) zgodnie ze specyfikacjami producenta. Blot wystawiono na działanie filmu Kodak XAR w temperaturze około 80 ° C. Analiza Northern blot. Zwierzęta uśmiercano przez śmiertelne wstrzyknięcie 50 mg pentobarbitalu sodu (Abbott Laboratories, North Chicago, Illinois, USA). Read more „Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego cd”

Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego ad

PGI2 w aerozolu zmniejsza nadciśnienie płucne i przetokę oraz poprawia utlenowanie tętnicze w przypadku braku działań ogólnoustrojowych u pacjentów z ciężkim zapaleniem płuc (20); ta forma terapii jest tak samo skuteczna jak wziewny tlenek azotu u pacjentów z ostrym zespołem niewydolności oddechowej (21). W zwierzęcym modelu niewydolności oddechowej z nadciśnieniem płucnym, wziewna prostacyklina (działająca transepitellalnie z selektywnością płucną) przewyższała dożylną prostacyklinę w poprawianiu utleniania i hemodynamice płucnej (22). Celem niniejszego badania było zbadanie roli nadprodukcji płucnej prostacykliny na rozwój nadciśnienia płucnego za pomocą transgenicznej myszy, która została opracowana do selektywnej nadekspresji PGIS w komórkach nabłonka płucnego. Aby określić biologiczny wpływ nadekspresji PGIS, zwierzęta były narażone na przewlekłe niedotlenienie i przeprowadzono ocenę ciśnienia w prawej komorze i przebudowy naczyń płucnych. Wykazujemy, że nadekspresja PGIS zapobiega płuczkowej remodelacji naczyniowej z powodu przewlekłego niedotlenienia. Read more „Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego ad”

Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego

Syntaza prostacykliny (PGIS) jest ostatnim zaangażowanym enzymem w szlaku metabolicznym prowadzącym do produkcji prostacykliny (PGI2). Pacjenci z ciężkim nadciśnieniem płucnym mają niedobór PGIS ich naczyń przedkapilarnych, ale znaczenie tego niedoboru dla przebudowy naczyń płucnych pozostaje niejasne. Postawiliśmy hipotezę, że selektywna nadmierna ekspresja PGIS w płucach może zapobiegać rozwojowi nadciśnienia płucnego. W celu zbadania tej hipotezy, transgeniczne myszy wytworzono z wybiórczą nadekspresją płucnego PGIS, stosując konstrukt promotora ludzkiego białka powierzchniowo czynnego 3,7 kb (SP-C) i szczurzego cDNA PGIS. Transgeniczne myszy (Tg +) i nietransgeniczne mioty z rodziny miot (Tg.) Poddano symulowanej wysokości 17 000 stóp przez 5 tygodni i zmierzono ciśnienie skurczowe prawej komory (RVSP). Read more „Nadekspresja syntazy prostacyklinowej u myszy transgenicznych chroni przed rozwojem hipoksycznego nadciśnienia płucnego”

Rola mediatora wnikania wirusa opryszczki jako negatywnego regulatora odpowiedzi pośredniczonych przez limfocyty T ad 7

Barwienie H & E na skrawkach tkanek zamkniętych przeprowadzono zgodnie ze standardową procedurą. Komórki przechodzące apoptozę wykryto przy użyciu zmodyfikowanej metody TUNEL w ośrodku immunohistochemicznym na Uniwersytecie w Chicago. Pokrótce, sekcje śledziony inkubowano z 2 mM sprzężonym z digoksygeniną dUTP (Chemicon Inc.) i 5 U końcowej transferazy dezoksyrybonukleotydowej (TdT) w buforze TdT (0,5 M kakodylanu [pH 6,8], mM CaCl2, 0,5 mM DTT, 0,05 % BSA, 0,15 M NaCl). Po płukaniu w soli fizjologicznej buforowanej Tris sekcje inkubowano z przeciwciałem anty-owczym Ig sprzężonym z HRP (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.). Rozwój barwy dla związanego HRP był z 3-amino-9-etylokarbazolem (Sigma-Aldrich). Read more „Rola mediatora wnikania wirusa opryszczki jako negatywnego regulatora odpowiedzi pośredniczonych przez limfocyty T ad 7”

Rola mediatora wnikania wirusa opryszczki jako negatywnego regulatora odpowiedzi pośredniczonych przez limfocyty T ad 6

Dlatego HVEM może odgrywać podwójną rolę w aktywacji limfocytów T i homeostazie, w zależności od ligandu i zaangażowania receptora podczas odpowiedzi immunologicznych. Interesujące będzie ustalenie, w jaki sposób HVEM może odbierać i dostarczać różne sygnały w przyszłości. Metody Myszy. Myszy C57BL / 6 zakupiono w The Jackson Laboratory. Myszy utrzymywano w określonych warunkach wolnych od patogenów. Read more „Rola mediatora wnikania wirusa opryszczki jako negatywnego regulatora odpowiedzi pośredniczonych przez limfocyty T ad 6”

Rola mediatora wnikania wirusa opryszczki jako negatywnego regulatora odpowiedzi pośredniczonych przez limfocyty T ad 5

Komórki DLN z HVEM. /. myszy zawierały wyższą częstotliwość komórek wytwarzających IFN (P <0,001). Przedstawiono jeden z 3 eksperymentów. Dyskusja Dane z wielu poprzednich badań sugerują, że w działaniu kostymulującym LIGHT pośredniczył jego udział w HVEM, receptorze wyrażanym na komórkach T: (a) Wykazano, że LIGHT na obu komórkach DC i T zwiększa proliferację komórek T i produkcję cytokin. Read more „Rola mediatora wnikania wirusa opryszczki jako negatywnego regulatora odpowiedzi pośredniczonych przez limfocyty T ad 5”