Długotrwałe utrzymywanie się jąder dawców u pacjentów z dystrofią mięśniową Duchennea otrzymujących przeszczep szpiku kostnego

Dystrofia mięśniowa Duchenne a (DMD) jest ciężkim postępującym zaburzeniem mięśni wywołanym przez mutacje w genie dystrofiny. Badania wykazały, że komórki szpiku kostnego przeszczepione myszom mdx, które są śmiertelnie napromieniowane, mysim modelem DMD, mogą stać się częścią mięśniaków mięśni szkieletowych. Nie wiadomo, czy komórki szpiku ludzkiego mają taką zdolność. Poniżej przedstawiamy analizę biopsji mięśni od pacjenta z DMD (DMD-BMT1), który przeszedł przeszczep szpiku kostnego w wieku roku w przypadku ciężkiego złożonego niedoboru odporności związanego z chromosomem X, u którego zdiagnozowano DMD w wieku 12 lat. Analiza biopsji mięśni z DMD-BMT1 wykazała obecność jąder donorowych w niewielkiej liczbie mięśniówki mięśniowej (0,5-0,9%). Większość mięśniaków produkuje skróconą izoformę w ramce dystrofiny pozbawionej eksonów 44 i 45 (nie typu dzikiego). Obecność jąder pochodzących od szpiku kostnego w mięśniu tego pacjenta dokumentuje zdolność egzogennych ludzkich komórek szpiku kostnego do łączenia się w mięśnie szkieletowe i utrzymują się do 13 lat po transplantacji. Wstęp Przeszczep szpiku kostnego (BMT) stosuje się w leczeniu różnych chorób u ludzi, takich jak ciężki złożony niedobór odporności (SCID) (1, 2), niedokrwistość Fanconiego (3, 4), osteogenesis imperfecta (5, 6) oraz wrodzone błędy metabolizmu lub funkcji makrofagów, takich jak choroby spichrzania lizosomalnego lub osteopetroza (7, 8). Dorosły szpik kostny (BM) zawiera mezenchymalne komórki progenitorowe komórek macierzystych (MSC), które mogą powodować powstawanie osteocytów, chondrocytów, adipocytów i mięśni szkieletowych (9, 10). Szpik zawiera również komórki progenitorowe komórek nerwowych (11, 12), wątrobowych (13, 14), sercowych (15, 16) i nabłonkowych (17), co wskazuje na potencjał BMT do naprawy tkanek niehematopoetycznych. Wszczepienie komórek pochodzących od dawców w tkankach niehematyczno-poetycznych opisano u ludzi biorców BMT (18, 19). Jednak najnowsze odkrycia wykazały, że komórki BM łączą się, a następnie adaptują fenotyp komórek gospodarza in vitro, kwestionując w ten sposób zdolności transróżnicowania komórek BM in vivo (20). Dystrofia mięśniowa Duchenne a (DMD), spowodowana mutacją genu dystrofiny, jest najczęstszą i najcięższą postacią dystrofii mięśniowej, z utratą niezależnej ambicji w wieku około 10 lat (21, 22). Utratę białka dystrofiny obserwuje się także u myszy mdx, mysiego modelu DMD (23). U myszy mdx i DMD ekspresja dystrofiny jest przywracana w obrębie miofibrów rewersyjnych i wynika z pominięcia eksonów otaczających mutację, dając początek skróconym transkrypcjom w ramce (24. 26). Mięśniaki mięśni szkieletowych są wielojądrowymi strukturami syncytialnymi, które powstają w wyniku fuzji jednojądrzastych mioblastów (27). Oprócz mioblastów, inne komórki mogą uczestniczyć w tworzeniu miotubul in vitro (28) lub w fuzję z wcześniejszymi mięśniakami in vivo (29. 33). Tak więc, w terapii zaburzeń mięśniowych fuzja komórek typu dzikiego z mięśniami dystroficznymi prowadzi do włączenia normalnych jąder zdolnych do ekspresji pożądanego produktu genu (34). Badania na myszach mdx wykazały, że różne typy komórek mogą przyczyniać się do naprawy dystroficznych mięśniaków mięśniowych in vivo, w tym mioblastów (35), fibroblastów (29) i komórek BM po BMT (30. 32). Dlatego obecnie trwają przedkliniczne badania BMT w leczeniu dystrofii mięśniowej. Tutaj opisujemy pacjenta, DMD-BMT1, który otrzymał BMT w wieku roku dla SCID związanego z X, zdiagnozowano DMD w wieku 12 lat i ma bardzo łagodny fenotyp dystrofii mięśniowej. Ten przypadek stanowi wyjątkową okazję do zbadania, czy ludzkie komórki szpiku kostnego mają potencjał do wszczepienia się w chore mięśnie szkieletowe, utrzymują się przez 13 lat po BMT i przyczyniają się do łagodnego fenotypu pacjenta. Metody Badania zostały przeprowadzone zgodnie z protokołem zatwierdzonym przez Komisję Badania Klinicznego (Institutional Review Board) Szpitala Dziecięcego w Los Angeles, za świadomą zgodą rodziców pacjenta i zgodą pacjenta, określaną jako DMD-BMT1. Analiza próbek DNA skóry, szpiku kostnego i krwi obwodowej. Fibroblasty skóry DMD-BMT1 i MSC pochodzące z BM hodowano do konfluencji w DMEM 10% FCS lub Dexter s Original Medium (Life Technologies Inc., Grand Island, New York, USA). Limfocyty krwi obwodowej wyizolowano metodą separacji Ficoll (Amersham-Pharmacia Biotech Europe GmbH, Uppsala, Szwecja), a sortowanie FACS zastosowano do oczyszczenia limfocytów T CD3 + i komórek mieloidalnych CD13 / CD14 +, odpowiednio. Genomowe DNA ekstrahowano przy użyciu zestawu Puregene (Gentra Systems Inc., Minneapolis, Minnesota, USA). Ekstrakty dystrofiny amplifikowano za pomocą kompleksowego zestawu starterów (36)
[więcej w: gorvita zielony jęczmień opinie, carcinoma adenoides cysticum, klinika stomatologiczna łódź ]
[podobne: sklep łysoń, bartnik pl, sprzęt pszczelarski łysoń ]