Mutacje w kinazie białkowej A R1 Podjednostka regulacyjna powoduje rodzinną postać szpiczaka serologicznego i kompleks Carneya ad 5

Przedstawiono zautomatyzowane analizy sekwencji dzikich i zmutowanych eksonów 7, 8 i 5 amplifikowanych z prawidłowych i dotkniętych osób w rodzinach odpowiednio YA, YB i YF. Sekwencję nici sensownej pokazano dla rodziny YA i nici antysensownej dla rodzin YB i YF. Heterozygotyczną delecję 1-bp odnotowano w rodzinie YA, a delecje 2-bp w rodzinach YB i YF (strzałki, usunięto zasady podkreślono). Wszystkie te mutacje skutkują przesunięciem ramki z wynikającymi z tego przedwczesnymi kodonami stop. PRKAR1. analiza w przypadku śluzaka serca. Przesunięcie ramki PRKAR1. mutacje obserwowane w rodzinach YA, YB i YF przyniosłyby wszystkie skrócone produkty białkowe pozbawione domen wiążących cAMP (Figura 3) gdyby zmutowane allele uległy transkrypcji i translacji. Alternatywnie, te zmutowane allele mogą być zerowymi allelami z powodu degradacji zmutowanego mRNA w wyniku rozpadu z udziałem nonsensu (20). Aby odróżnić te możliwości, wyrażenie R1. białko zostało określone specyficznym przeciwciałem do końca NH2 R1. metodą Western blot (Figura 5) limfoblastów pochodzących od zdrowych osobników, limfoblastów pochodzących od osobnika dotkniętego chorobą (rodzina YA, IV-1 z mutacją delecją Glu208 / zmianę ramki odczytu opisaną powyżej) i śluzaka lewego przedsionka od tego osobnika dotkniętego chorobą. Tylko pełnej długości R1. białko było obecne we wszystkich trzech próbkach bez żadnego dowodu obcięcia produktu. Densytometria wykazała, że ilość R1. poziom białka w limfocytach kompleksu Carneya był o 60% mniejszy niż w prawidłowych limfocytach, zgodnie z haploin-sennością PRKAR1. w kompleksie Carney. Pełnej długości R1. był również obecny w próbce śluzaka przedsionkowego, co sugeruje, że allel typu dzikiego jest zachowany w guzie. Analiza cytogenetyczna tego śluzaka przedsionkowego ujawniła prawidłowy kariotyp 46, XX i nie wykazała żadnych nieprawidłowości w chromosomie 17q23-24. Genotypowanie z STR D17S789, które jest ściśle genetycznie i fizycznie związane z PRKAR1. gen jak opisano powyżej, jak również z powtórzeniem trinukleotydu ATT 21 kb 3. do PRKAR1. sekwencja kodująca nie wykazała utraty heterozygotyczności w tym locus. (Genotypowanie z powtórzeniem dinukleotydu AG w 5. Nieulegającej translacji sekwencji PRKAR1 (3 było niedoinformowane.) Analiza sekwencji PRKAR1. ekson 7 pokazuje, że oba zmutowane allele typu dzikiego i zmutowane są obecne w tym guzie. Na koniec, do tej pory nie wykryliśmy żadnych dodatkowych wariantów sekwencji w PRKAR1. amplifikowane z tego śluzaka przedsionkowego. Densytometria analizy Western blot (rysunek 5) R2. podjednostki regulatorowej w tych samych próbkach (prawidłowe limfoblasty, limfoblasty kompleksu Carneya i śluzaka przedsionkowego) analizowane dla R1. wyrażenie białka wykazało, że R2. ekspresja była podobna w prawidłowych i dotkniętych limfocytach, ze zmniejszeniem R1 .: R2. stosunek drugorzędny do zmniejszenia R1. wyrażenie zgodne z PRKAR1. haploinsufficiency. Jednak w próbce guza nastąpiło odwrócenie w R1 .: R2. stosunek, który może odnosić się do dalszego zmniejszenia R1. i / lub zwiększono R2. (Figura 5). Figura 5 Analiza Western blot dla R1. i R2. w prawidłowych limfoblastach, limfoblastach w kompleksie Carney a i w zespole Śluzaka sercowego kompleksu Carneya. (a) Pozytywne kontrole przeciwciał dla R1. i R2. poddawano elektroforezie i analizowano metodą Western blot, jak opisano w Methods. (b, c) Lizaty białka z limfoblastów z (b) zdrowych osobników i (c) osobników dotkniętych kompleksem Carney (rodzina YA, IV-1) poddano elektroforezie i analizowano. Densytometria ujawniła podobne poziomy R2. białko w dwóch próbkach, ale spadek o 60% w R1. poziomy. (d) R1. i R2. analizowano w lizacie z lewego ślinaka przedsionkowego wyciętego z indywidualnej IV-1 w rodzinie YA. Densytometria została użyta do określenia R1. i R2. wyrażenie we wszystkich próbkach i stosunek R1 .: R2. został obliczony. Odwrócenie R1 .: R2. stosunek jest obserwowany w próbce nowotworu w porównaniu z dotkniętymi i niedotkniętymi limfocytami. Dyskusja Pokazaliśmy, że mutacje w PRKAR1. gen kodujący R1. Podjednostka regulatorowa powoduje rodzinne śluzaki serca w autosomalnym dominującym kompleksie Carneya. Osoby zagrożone wystąpieniem Śluzaków serca dotkniętych zespołem Carneya rozwijają się na podstawie PRKAR1. haploinsufficiency wtórne do heterozygotycznej konstytucyjnej mutacji zmiany ramki odczytu PRKAR1. w wyniku czego powstaje allel niewysprasowany. Co więcej, PRKAR1. działa jako gen supresorowy guza w sercu i innych tkankach, prawdopodobnie poprzez regulację aktywności PKA. PRKAR1. działanie jako gen supresorowy nowotworu jest zgodne z ustaleniami (21) wykazującymi, że PRKAR1. uwzględnia specyficzne tkankowo zahamowanie transkrypcji genu w locus TSE1 na chromosomie 17q24. Haploinsuficiency innej kinazy, STK11, a następnie mutacja somatyczna, powoduje fenotypowo powiązany zespół Peutza-Jeghersa, charakteryzujący się łagodnymi nowotworami i plamistym zabarwieniem skóry (22)
[hasła pokrewne: gorvita zielony jęczmień opinie, przeszczep szpiku kostnego, płatki owsiane na wodzie ]
[przypisy: podchloryn sodu dawkowanie, wrzodziejące zapalenie jelita grubego dieta, przeszczep szpiku kostnego ]