Mutacje w kinazie białkowej A R1 Podjednostka regulacyjna powoduje rodzinną postać szpiczaka serologicznego i kompleks Carneya czesc 4

Podjednostka regulatorowa zależnej od cAMP PKA była również włączona do minimalnego przedziału CAR locus. PRKAR1. wcześniej mapowano (jako lokus specyficzny dla tkanki [TSE1]) do chromosomu 17q23-q24 przez analizę hybrydową komórek somatycznych (15, 16). Dodatkowo, zauważyliśmy, że ludzki genomowy klon BAC 155 kb RP11-62F10 (nr akcesyjny AC005799.1) zawierał sekwencje odpowiadające obu PRKAR1. i anonimowy STR D17S789, który nie wykazywał rekombinacji z genem choroby złożonej z Carney w rodzinach, które badaliśmy. Dlatego PRKAR1. lokalizacja chromosomowa, znana rola PKA w transdukcji sygnału i rozwoju komórek oraz we wszechobecnym wzorze ekspresji R1. podjednostka (16. 18) wszyscy sugerowali, że PRKAR1. był genem kandydata na chorobę dla kompleksu Carney. Sekwencja kodująca PRKAR1. ma długość 1,146 kb. Porównanie sekwencji genomowej otrzymanej z BAC RP1162F10 z PRKAR1. Sekwencja cDNA wyjaśniła granice intron-egzon i pokazała, że gen składał się z 11 eksonów (fig. 3), a nie 10, jak opisano wcześniej (19). Jednakże, żadna nowa sekwencja genomowa nie była dostępna w bazie danych projektu ludzkiego genomu odpowiadającej eksonom i 2 PRKAR1. gen do porównania z poprzednio opisaną strukturą genomową (nr dostępu Y07641). Analiza sekwencji genomowej PRKAR1. pseudogen zawarty w klonie BAC RP4-621B10 (nr ref .: 19, nr dostępu AL13883), który mapuje się do chromosomu i rozpoczyna się sekwencją 5. do otwartych ramek do czytania podniosła możliwość, że proponowana granica (19) między eksonami i 2 może być nieprecyzyjna. Rysunek 3 Trzy mutacje zmiany ramek w PRKAR1. to powoduje kompleks Carney. Schematyczne przedstawienie PRKAR1. cDNA pokazuje eksony 1. 11. Regiony kodujące funkcjonalne domeny (domena dimeryzacyjna, miejsca antygenowe, miejsce zawiasowe / pseudofosforylacyjne, domeny wiążące cAMP A i B) R1. są oznaczone (13). Lokalizacja PRKAR1. mutacje delecji. FSterGly208 w rodzinie YA,. FSterVal253 w rodzinie YB i. FSterThr163 w rodzinie YF. Mutacje oznaczono za pomocą. FSter w celu wskazania delecji z uzyskanym przesunięciem ramki odczytu i przedwczesnym kodonem stopu oraz przez pierwszą resztę aminokwasową, na którą wpływa delecja. Aby przeanalizować sekwencję kodującą PRKAR1. gen dla mutacji, które mogą powodować kompleks Carney, zaprojektowaliśmy startery PCR z sekwencji intronowej, flankując egzony 3 (11 i zamplifikowaliśmy te eksony z próbek ludzkiego genomowego DNA. Z powodu niejednoznaczności dotyczącej organizacji genomu PRKAR1. eksony i 2, zaprojektowaliśmy oligonukleotydy oparte na sekwencji kodującej z eksonu 3 i na 5. nieulegająca translacji sekwencja w eksonie w celu amplifikacji, za pomocą RT-PCR, eksonów i 2 z próbek limfocytów / limfoblastów RNA. PRKAR1. eksony (3l zamplifikowane z pięciu niespokrewnionych probandów kompleksu Carneya poddano następnie analizie sekwencji. Dwa probandy pochodziły z rodzin, które zostały połączone z chromosomem 17q24 (rodziny YA i YB), a pozostałe (YE, YF i SY2) pochodziły z rodzin, które były zbyt małe, aby ostatecznie ustalić połączenie z dowolnym locus chromosomalnym. Kliniczne cechy rodzin YA i YB zostały wcześniej opisane (8). Probandy z pozostałych trzech rodzin wykazują plamistą pigmentację skóry i miały śluzaki serca. Zaobserwowaliśmy heterozygotyczne PRKAR1. mutacje genowe (Figury 3 i 4) w trzech probandach złożonych Carneya, w tym dwa probandy z rodzin z chromosomem 17q24y (YA i YB). Dwukierunkowa analiza sekwencji wykazała obecność delecji 1-bp (G) nukleotydu 710 w Gly208 u dotkniętych osób, ale nie u osób nie dotkniętych chorobą w rodzinie YA, z późniejszymi kodonami 13 przestawiania ramki odczytu i przedwczesnego zatrzymania. Delecję 2-bp (TC) nukleotydów 845-846 w Val253 zaobserwowano u dotkniętych osób, ale nie u osób z rodzin YB, które nie zostały dotknięte chorobą, z późniejszymi kodonami opóźnionego przełączania ramek i 15 przedwczesnego zatrzymania. Delecja 2-bp (TG) nukleotydów 576. 577 w Thr163 była obecna u wszystkich dotkniętych osób, ale nie u nietkniętych osób w rodzinnej YF z uzyskaną zmianą ramki prowadzącą do przedwczesnego zatrzymania 6 kodonów później. Mutacje (. FSterGly208 w rodzinie YA,. FSterVal253 w rodzinie YB,. FSterThr163 w rodzinie YF) zostały potwierdzone przez analizę sekwencji sensownej i antysensownej oraz przez elektroforezę żelową produktów PCR w celu zademonstrowania różnych długości alleli. Żadnego z tych wariantów sekwencji nie zaobserwowano w 100 normalnych niespokrewnionych chromosomach. Zaobserwowaliśmy również wstawienie tyminy w pojedynczej parze zasadowej w przewodzie poli-T w intronie 3, który jest 9 nukleotydami 5. do strony akceptora eksonów 4. Ta insercja była powszechnym polimorfizmem obecnym u 50% osób z genotypem. Rysunek 4 Analiza mutageniczna PRKAR1. w rodzinach złożonych z Carney YA, YB i YF
[przypisy: carcinoma adenoides cysticum, finasteryd skutki uboczne, podchloryn sodu dawkowanie ]
[hasła pokrewne: czym słodzić zamiast cukru, jak zakończyć karmienie piersią, płatki owsiane na wodzie ]