Ocena aktywności choroby w dystrofiach mięśniowych za pomocą nieinwazyjnego obrazowania ad 5

W przypadku braku uszkodzenia nie znaleziono miamerów zawierających ekspresję lucyferazy. Po ustaleniu, że ten model myszy był zdolny do raportowania aktywności regeneracyjnej w sposób czuły i niezawodny, zaczęliśmy monitorować myszy Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP w celu oceny zmian sygnałów lucyferazy w czasie. Stwierdziliśmy, że możliwe jest nieinwazyjne monitorowanie aktywności choroby, potwierdzając nasze wyniki analizą histopatologiczną i odkrywając aspekty naturalnej historii modelu myszy SJL w tym procesie. Niezawodność i powtarzalność tego modelu była niezwykle wysoka i porównywalna do złotego standardu pomiarów histologicznych aktywności choroby. Ponadto poszczególne myszy wykazywały wzorzec wzrostu aktywności lucyferazy w czasie, który był równoległy do zmian obserwowanych w całej kohorcie (Suplementowa Figura 4B), dostarczając dalszego wsparcia dla tego systemu obrazowania do stosowania w monitorowaniu aktywności choroby w różnych rodzajach prób terapeutycznych, w pojedyncze myszy mogą być używane jako własne kontrole w badaniach typu krzyżowego. Jednak technologia ta nie jest optymalna do obrazowania mięśni, takich jak przepona, w jamie ciała, ponieważ sygnał świetlny jest tłumiony przez warstwy tkanek i nie można go odróżnić od jakiegokolwiek sygnału pochodzącego z mięśni na powierzchni. Na koniec należy zauważyć, że szczep LuSEAP zaprojektowano jako szczep podwójnie reporterowy, wyrażający nie tylko lucyferazę, ale także wydzielanie fosfatazy alkalicznej po rekombinacji za pośrednictwem Cre. Jednakże, jak już wcześniej zauważono (10), nie znaleźliśmy oznaczeń poziomów fosfatazy alkalicznej w surowicy, aby zapewnić wiarygodną miarę liczby komórek. W związku z tym skupiliśmy się wyłącznie na reporterze lucyferazy do celów tych badań. Wybraliśmy model myszy SJL z kilku powodów, z których kilka omówiono bardziej szczegółowo poniżej. Po pierwsze, jest to model, który wykazuje progresywne i stałe zmiany w ciągu życia myszy, w przeciwieństwie do innych modeli dystrofii ludzkiej, takich jak mysz mdx, która wykazuje wczesny wybuch degeneracji i regeneracji, po którym następuje stabilniejszy kurs po kilka miesięcy (26. 28). Po drugie, jest dłuższy. Przedkliniczny. a nawet. prepathological. faza, podczas której będziemy w stanie ocenić wrażliwość naszej nieinwazyjnej metodologii obrazowania na subtelne oznaki pojawienia się choroby, jak wspomniano powyżej, odkrycie, które będzie miało krytyczne znaczenie w ocenie interwencji terapeutycznych. Po trzecie, istnieje interesująca anatomiczna lokalizacja nasilenia choroby u myszy, naśladująca ją u ludzi, co można również ocenić za pomocą naszej nieinwazyjnej metody obrazowania. Wreszcie, kilka doniesień sugeruje, że różne interwencje farmakologiczne mogą być korzystne w progresywnych zmianach obserwowanych u myszy SJL (29. 31), co czyni je szczególnie przydatnymi do nieinwazyjnego obrazowania w połączeniu z eksperymentalnymi środkami terapeutycznymi. Objawy kliniczne LGMD2B pojawiają się zwykle w drugiej lub trzeciej dekadzie życia. Stopień zaawansowania tej choroby jest wysoce zmienny u pacjentów, bez korelacji między wiekiem wystąpienia objawów a stopniem pogorszenia się mięśni (32, 33). Mysz SJL została wcześniej opisana jako mająca powoli postępującą dystrofię mięśniową w wieku 6 miesięcy, a następnie szybką progresję choroby w kolejnych miesiącach (16, 17). Podobnie, mysz A / J, inny naturalnie występujący mysi model LGMD2B, nie wykazywała praktycznie żadnego histologicznego dowodu aktywności choroby aż do ukończenia 5 miesiąca życia (14). Nasze badania obrazujące ujawniły, że wzmożona aktywność regeneracyjna zaczęła się znacznie wcześniej u myszy SJL, niż zostało to zakończone przez zastosowanie konwencjonalnych markerów aktywności choroby, co pokazuje zwiększoną wrażliwość tej technologii obrazowania. Dzięki nieinwazyjnemu obrazowaniu i potwierdzonemu przez wykrywanie włókien dodatnich lucyferazowo in situ, jak również analizom biochemicznym, stwierdziliśmy pojawienie się objawów choroby w wieku 3 miesięcy (Figura 2C, Figura 3, C i D oraz Figura 4B). Chociaż skumulowany sygnał lucyferazy był niski w porównaniu z późniejszymi punktami czasowymi, różnice między szczepami SJL i kontrolnymi były bardzo znaczące nawet w tych wczesnych punktach czasowych (Suplementowa Figura 4C). Ta reakcja regeneracyjna wzrastała w sposób ciągły w czasie, co odzwierciedla postępującą naturę LGMD2B (ryc. 2C). Niedobór dysferliny powoduje szeroki zakres klinicznych fenotypów u ludzi (13). LGMD2B ogólnie charakteryzuje się wystąpieniem objawów choroby w proksymalnych mięśniach kończyn dolnych niezależnie od płci, podczas gdy miopatia Miyoshi (MM), choroba powodowana również przez mutacje w genie dysferlin, została opisana jako początkowo wpływająca na mięśnie tylnej kończyny tylnej ( 17, 21)
[hasła pokrewne: operacje plastyczne dr szczyt, jak zakończyć karmienie piersią, przeszczep szpiku kostnego ]
[przypisy: jak zakończyć karmienie piersią, płatki owsiane na wodzie, podchloryn sodu dawkowanie ]