Ocena aktywności choroby w dystrofiach mięśniowych za pomocą nieinwazyjnego obrazowania ad 6

Modele myszy LGMD2B pokazują, że proksymalne mięśnie kończyn są przede wszystkim dotknięte niewielką aktywnością choroby wykrytą w mięśniach dystalnych (16). W zgodzie z tymi odkryciami, pokazujemy, że proksymalne mięśnie kończyn mają więcej aktywności regeneracyjnej niż dystalne mięśnie rozpoczynające się w wieku 6 miesięcy (Figura 3B). Chociaż sygnały lucyferazy były większe w proksymalnych grupach mięśniowych, aktywność choroby wykryto również w dystalnych mięśniach kończyn w wieku 3 miesięcy (Figura 3B). Nie stwierdzono istotnych różnic płci w początkowym (lub progresji) aktywności choroby u myszy (rysunek 2D). Ponadto, większa liczba miowłóf-dodatnich lucyferaz wykryto w mięśniach TA niż w żołądku (fig. 4A), cecha odróżniająca 2 choroby, LGMD2B i MM, wynikające z mutacji w genie dysferiny, potwierdzając wniosek, że myszy te rekapitulują anatomiczny rozkład aktywności choroby LGMD2B. Wcześniej doniesiono, że aktywność choroby w modelu myszy SJL można zobrazować za pomocą MRI, stosując wzmocniony środek kontrastujący Gadofluorine-M (34). Podczas gdy możliwe było wykrycie zwiększonej przepuszczalności włókien mięśniowych do tego czynnika, co korelowało z zaawansowanym postępem choroby, nie było wystarczająco czułe, aby wykryć wczesne zmiany patologiczne. Dodatkowo, granica wykrywalności zależała od ilości kontrastującego środka podawanego myszom, co mogło być ograniczające w analizie (34). Chociaż MRI nie wymaga rozmnażania myszy dystroficznych za pomocą myszy reporterowych, nieinwazyjne obrazowanie aktywności choroby za pomocą bioluminescencji lucyferazy jest tańsze, szerzej dostępne i znacznie bardziej wszechstronne w badaniach laboratoryjnych do nieinwazyjnego monitorowania postępów choroby w przypadku badań historii naturalnej lub badań odpowiedzi na leczenie. eksperymentalne terapeutyki. Celem tego badania było wygenerowanie modelu mysiego, w którym można mierzyć aktywność regeneracyjną mięśni w czasie w celu monitorowania postępu aktywności choroby lub odpowiedzi na leczenie dystrofii mięśni. Tradycyjnie, skuteczność leczenia lekami dystrofii mięśniowych badano stosując, samodzielnie lub w połączeniu, pomiary siły, stężenia biomarkerów w surowicy i zmiany w histopatologii. Alternatywnie system Pax7CreER / LuSEAP będzie nieoceniony w testowaniu farmakologicznych, komórkowych i genetycznych metod leczenia dystrofii mięśniowych. Zwiększona czułość, wiarygodne oznaczanie ilościowe, umiejętność wykorzystania każdego zwierzęcia jako własnej kontroli i eliminacja potrzeby wykonywania pracochłonnych i czasochłonnych badań histopatologicznych pozwolą na bardziej wysokoprzepustową analizę leczenia in vivo dzięki tej nieinwazyjnej metodzie monitorowania choroby postęp. Metody Zwierzęta. Myszy Pax7CreER i LuSEAP były prezentem Charlesa Kellera, Oregon Health and Science University, Portland, Oregon, USA. Myszy SJL zakupiono od Jackson Laboratories. Obrazowanie bioluminescencyjne. Obrazowanie bioluminescencyjne przeprowadzono przy użyciu systemu Xenogen IVIS-Spectrum (Caliper Life Sciences). Myszy znieczulono stosując 2% izofluran i 100% tlenu przy szybkości przepływu 2,5 l / min. Następnie 300 ul jałowego substratu świetlika D-lucyferyny 50 mg / ml (Biosynth International Inc.) rozpuszczonego w PBS podawano przez wstrzyknięcie ip, i 23 minuty po wstrzyknięciu substratu, myszy obrazowano przez 30 sekund przy maksymalnym gromadzeniu światła (f-stop 1) w najwyższej rozdzielczości (małe binning). Każdy obraz został zapisany do późniejszej analizy. Skale po prawej stronie obrazów na ryc. 1B, ryc. 2B i ryc. 3A reprezentują emisję fotonów z powierzchni tkanek i są wyrażone jako fotony / sekunda / centymetr kwadrat / steradian (p / s / cm2 / sr) (lub promieniowanie) . Analiza obrazu. Analizę każdego obrazu przeprowadzono za pomocą oprogramowania Living Image, wersja 4.0 (Caliper Life Sciences). Pokrótce, ręcznie wygenerowane koło umieszczono na obszarze zainteresowania (ROI) i zmieniono jego rozmiar tak, aby otaczał całą kończynę lub określony region myszką typu dzikiego. Ten zarys ROI został następnie zduplikowany i umieszczony na kończynie myszy z niedoborem dysferliny. W przypadkach, w których kontrolna mysz typu dzikiego nie była obrazowana jednocześnie, ROI było otoczone tylko dla eksperymentalnej myszy. Uszkodzenie mięśni szkieletowych. Myszy znieczulono stosując 2% izofluran i 100% tlenu przy szybkości przepływu 2,5 l / min. Tylne kończyny zostały ogolone, a 25 ul 1,2% BaCl2 wstrzyknięto do mięśni TA za pomocą strzykawek insulinowych o pojemności 10 cm3 (9). Histologia i immunohistochemia. W określonych punktach czasowych myszy uśmiercano za pomocą asfiksji CO2, po czym nastąpiło przemieszczenie kręgów szyjnych
[hasła pokrewne: objawy refluksu u dzieci, płatki owsiane na wodzie, operacje plastyczne dr szczyt ]
[hasła pokrewne: wrzodziejące zapalenie jelita grubego dieta, przeszczep szpiku kostnego, gorvita zielony jęczmień opinie ]