Ocena aktywności choroby w dystrofiach mięśniowych za pomocą nieinwazyjnego obrazowania cd

Jako dodatkowe kontrole, wstrzyknięto myszom Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP sam nośnik (olej kukurydziany) i nie znaleziono dowodów na ekspresję lucyferazy (Suplementowa Figura 4A). U myszy leczonych tamoksyfenem sygnał lucyferazy gwałtownie wzrastał w czasie w mięśniach kończyn tylnych szczepu z niedoborem dysferliny, ale nie w szczepie typu dzikiego (figura 2, B i C, i dodatkowa postać 4B). Ta zwiększona aktywność regeneracyjna u myszy z niedoborem dysferliny była widoczna już w wieku 3 miesięcy i wzrastała w sposób ciągły przez 18 miesięcy (fig. 2C i dodatkowa figura 4C). Porównania między samcami i samicami myszy nie wykazały istotnych różnic płci w odniesieniu do progresji choroby (Figura 2D). Figura 2 Monitorowanie aktywności choroby u myszy z niedoborem dysferliny przez nieinwazyjne obrazowanie bioluminescencyjne. (A) Diagrammatyczne przedstawienie czasowego wzoru ekspresji lucyferazy u dystroficznych myszy Pax7CreER / LuSEAP. Po podaniu tamoksyfenu, podzbiór komórek satelitarnych wyraża ekspresję lucyferazy. W odpowiedzi na uraz lub zwyrodnienie mięśni, te komórki z dodatnią ekspresją lucyferazy aktywują się i proliferują, co prowadzi do powstania mioblastów pozytywnych wobec lucyferazy, które ostatecznie różnicują się i łączą w celu utworzenia nowych miowłókien, które będą wtedy pozytywne wobec lucyferazy. (B) Myszy Pax7CreER / LuSEAP typu dzikiego (po lewej) i z niedoborem dysferliny (po prawej), którym wstrzyknięto tamoksyfen w wieku 2 miesięcy, zobrazowano razem w 7 miesiącu życia. Skala po prawej stronie obrazu reprezentuje emisję fotonu z powierzchni tkanki i jest wyrażana jako p / s / cm2 / sr (lub promieniowanie). (C) Sygnały lucyferazy z mięśni tylnych kończyn tylnych myszy zarówno dzikich, jak i z niedoborem dysferliny mierzono przed podaniem tamoksyfenu (Pre-tam), w wieku 3 miesięcy, a następnie co miesiąc do 18 miesiąca życia. P <0,05 dla każdego pomiaru pomiędzy 3 a 18 miesiącem życia w grupie z niedoborem dysferliny w porównaniu ze szczepem kontrolnym; n = 12 Dysf + / + w porównaniu z Dysf. /. w każdym punkcie czasowym. (D) sygnały lucyferazy z odległych mięśni tylnych kończyn męskich i żeńskich myszy z niedoborem dysferiny (n = 12, takie same myszy jak w C). Aktywność lucyferazy w proksymalnych i dystalnych mięśniach kończyn. LGMD2B przejawia się początkowo i przede wszystkim w proksymalnych mięśniach kończyn, przy mniejszym zaangażowaniu dystalnych mięśni kończyn (21). Oceniliśmy aktywność choroby za pomocą sygnałów bioluminescencyjnych zgodnie z anatomicznymi lokalizacjami (ryc. 3A). Pomiary aktywności lucyferazy wskazują, że proksymalne mięśnie kończyn miały znacznie większą regenerację niż mięśnie dystalne rozpoczynające się w wieku 6 miesięcy (Figura 3B). Aktywność lucyferazy w obu proksymalnych i dystalnych grupach mięśni zwiększała się w sposób ciągły w czasie, przy czym różnice między nimi utrzymywały się aż do 12 miesiąca życia (Figura 3B). Figura 3 Aktywność poznawcza mięśni tylnych kończyn myszy Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP w funkcji wieku. (A) Mięśnie kończyn tylnych myszy Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP zobrazowano w wieku 3, 6, 9 i 12 miesięcy. Sygnały lucyferazy wzrastają w mięśniach kończyn tylnych w miarę upływu czasu, a więcej sygnałów pochodzi z mięśni proksymalnych po 6 miesiącu życia. Skala po prawej stronie obrazu reprezentuje emisję fotonu z powierzchni tkanki i jest wyrażana jako p / s / cm2 / sr (lub promieniowanie). (B) Sygnały lucyferazy oznaczano ilościowo w bliższych lub dalszych mięśniach kończyn tylnych myszy Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP. ** P <0,05; n = 12. (C) Reprezentatywne obrazy pokazujące przyrost mięśni mięśniowych z dodatnią lucyferazą w mięśniach czworogłowych myszy Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP w różnych grupach wiekowych. Pasek skali: 50 .m. (D) Ilościowe oznaczenie procentu włókienek dodatnich dla lucyferazy z myszy uśmierconych w 3, 6, 9 i 12 miesiącu życia. * P <0,05; n. 3; wartości w każdym punkcie czasowym w porównaniu do wieku 3 miesięcy. Pomiar ekspresji lucyferazy przez analizy histologiczne i biochemiczne w czasie. Jako korelację ze zmianami w aktywności lucyferazy wykrytej przez nieinwazyjne obrazowanie i jako dalszą walidację modelu, uśmiercano myszy w różnym wieku i izolowane mięśnie zarówno dla biochemicznych, jak i histologicznych badań ekspresji lucyferazy. W oparciu o czasową progresję aktywności lucyferazy określoną metodą nieinwazyjnego obrazowania (figura 2C), spodziewano się wzrostu ilości miowłókien pozytywnych wobec lucyferazy w czasie w wyniku aktywności regeneracyjnej w mięśniach. Rzeczywiście, stwierdziliśmy znaczny wzrost liczby włókien pozytywnych dla lucyferazy w czasie (fig. 3, C i D), z proksymalnymi mięśniami kończyn wykazującymi większy przyrost włókien dodatnich dla lucyferazy z wiekiem niż mięśnie dystalne (Figura 4A) . Zaskakująco, było stosunkowo mało włókien lucyferazy dodatnich w żołądku (fig. 4A) [więcej w: czym słodzić zamiast cukru, klinika stomatologiczna łódź, podchloryn sodu dawkowanie ] [podobne: carcinoma adenoides cysticum, operacje plastyczne dr szczyt, finasteryd skutki uboczne ]