Ocena aktywności choroby w dystrofiach mięśniowych za pomocą nieinwazyjnego obrazowania czesc 4

Pomiary aktywności lucyferazy w wyciągach z całego mięśnia również wykazały wzrost wraz z wiekiem, zgodny z wynikami nieinwazyjnego obrazowania. Włókna lucyferazy dodatnie nie zostały wykryte u zwierząt niesforroficznych i tylko poziomy aktywności lucyferazy można było wykryć w mięśniach 12-miesięcznych myszy z niedoborem dysferliny, którym wstrzyknięto podłoże (Suplementowa Figura 5). Figura 4 Aktywność regeneracyjna w bliższych i dalszych mięśniach kończyn tylnych myszy Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP. (A) Reprezentatywne obrazy włókien pozytywnych lucyferazy wykrywanych w bliższych i dalszych kończynach tylnych mięśni 12-miesięcznych myszy Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP. Pasek skali: 50 .m. (B) Mięśnie mięsaka czterokostnego myszy z niedoborem dysferiny mają zwiększoną aktywność enzymu lucyferazy w czasie. * P <0,05; n = 3. Aktywności lucyferazy mierzono biochemicznie w mięśniach myszy z określonych grup wiekowych, jak wskazano. Nieinwazyjne obrazowanie lucyferazą u myszy Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP koreluje z konwencjonalnymi histopatologicznymi objawami aktywności choroby. Klasyczne markery regeneracji mięśni u myszy obejmują pojawienie się centralnie zlokalizowanych jąder w obrębie włókien mięśni szkieletowych, jak również pojawienie się włókien, które eksprymują białka rozwojowe, takie jak embrionalny łańcuch ciężki miozyny (eMyHc) (22). W celu dalszego potwierdzenia nieinwazyjnego obrazowania aktywności lucyferazy u myszy Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP jako odbicie aktywności choroby, zbadaliśmy te konwencjonalne markery (Figura 5, A (D)). Centralnie zarodkowane miofibry zaczęły pojawiać się w wieku 3 miesięcy i stale narastały wraz z wiekiem zwierząt (rys. 5, A i B). W wieku 12 miesięcy prawie 50% włókien zostało centralnie zarodkowanych w szczepie z niedoborem dysferlin (Figura 5B). Nowo zregenerowane miofibry, które eksprymują eMyHc można również znaleźć w rosnącej liczbie jako myszy w wieku (Figura 5, C i D). U myszy typu dzikiego mniej niż 1% włókien było centralnie zarodkowanych i nie wykryto włókien pozytywnych dla eMyHc. Dlatego zarówno w zakresie przebiegu w czasie, jak i wielkości zmian, nieinwazyjne obrazowanie wiernie odzwierciedlało aktywność choroby i jej progresję za pomocą konwencjonalnej analizy. Figura 5 Histologiczne analizy mięśni myszy Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP w czasie. (A) Cryosections mięsaków czworogłowych 3-, 6-, 9- i 12-miesięcznych myszy barwiono H & E w celu oceny histopatologicznych dowodów postępu choroby. (B) Ilościowa analiza procentów centralnie zarodkowanych miowłókien w mięśniach czworogich myszy Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP w funkcji wieku. * P <0,05, ** P <0,005; n = 3; wartości w każdym punkcie czasowym w porównaniu do wieku 3 miesięcy. (C) Analizę seryjnych wycinków z mięśni myszy, jak w panelu A, barwiono przeciwciałem przeciwko eMyHc w celu oznaczenia regeneracji miofibrów. (D) Ilościowa analiza procentów włókien eMyHc-dodatnich w mięśniach czworogłowych myszy Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP w funkcji wieku. ** P <0,05, *** P <0,001; n = 3; wartości w każdym punkcie czasowym w porównaniu do wieku 3 miesięcy. Skalowane pręty: 50 .m. Dyskusja Poniżej prezentujemy nowatorski model myszy, w którym regenerację mięśni, cechę aktywności choroby w dystrofiach mięśniowych, można śledzić nieinwazyjnie za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego. Poprzez aktywację swoistej rekombinazy Cre komórki satelity, zaznaczono większość mięsnych komórek satelitarnych za pomocą lucyferazy znacznika linii genetycznej, co umożliwiło nam śledzenie regeneracji mięśni w ciągu 18 miesięcy u myszy z niedoborem dysferliny. Szczep Pax7CreER był wcześniej stosowany do śledzenia linii komórek satelitarnych mięśni u myszy typu dzikiego (9, 10, 12, 23). W jednym badaniu, wzrost mięśnia po urodzeniu, jak oceniono przez pomiar włączenia progenitorów wyrażających Pax7 w rosnące miowłókna, monitorowano przez 12 tygodni po podaniu tamoksyfenu myszom typu dzikiego w wieku 4 tygodni (10). Nasze badania przeprowadziliśmy po tym okresie rozwoju po narodzinach, w czasie, gdy mięśnie tylne kończyły się w pełni dojrzałe (24, 25), aby monitorować aktywność choroby jako funkcję regeneracji w mięśniu dystroficznym bez żadnych zakłócających aspektów wzrostu mięśni. Zatwierdziliśmy myszy Pax7CreER / LuSEAP jako. Reporter regeneracyjny. szczepu wykazując, że ostre uszkodzenie mięśnia spowodowało, że sygnał lucyferazy był zlokalizowany tylko w uszkodzonym obszarze tylnej kończyny. Zaobserwowaliśmy miotubiny zawierające lucyferazę i powstające miofibry z centralnym jądrem, co wskazuje, że te nowo zregenerowane włókna zostały utworzone (przynajmniej częściowo) z potomstwa komórek satelitarnych wyrażających lucyferazę (Figura 1C) [więcej w: wrzodziejące zapalenie jelita grubego dieta, sklep pszczelarski łysoń, bartnik bielsko ] [podobne: dom latających sztyletów cda, depilacja brazylijska poznań, czym słodzić zamiast cukru ]