Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy czesc 4

Porównanie sekwencji między ludzkim B5 i TSH-a a także A2 i wspólne. podjednostka (A). (b) Drożdżowe dwuhybrydowe analizy oddziaływań między A2 i różnymi genami podjednostek w rodzinie hormonów glikoproteinowych. Komórki drożdży transfekowano plazmidami kodującymi A2 i różne geny podjednostek poddane fuzji z domeną aktywującą GAL4 i domeną wiążącą, odpowiednio. Wyraźny wzrost kolonii wyrażających A2 i B5 wskazuje na silne oddziaływanie między tymi białkami. Read more „Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy czesc 4”

Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy cd

Supernatant naniesiono na kolumnę kationowymienną Mono S HR10 / 10 (Amersham Pharmacia Biotech) w 4 ° C (20 mM kwas 2- [N-morfolino] etanosulfonowy, pH 6,6), a frakcje szczytowe zastosowano do immunoblottingu w celu wykrycia frakcji z antygenem A2 i B5. Pozytywne frakcje następnie dializowano wobec PBS i zatężono przed naniesieniem na kolumnę Superdex G75 w celu frakcjonowania wielkości i określenia aktywności biologicznej. Czystość heterodimeru A2 / B5 potwierdzono przez barwienie srebrem po SDS-PAGE, a oznaczenie ilościowe oczyszczonego A2 / B5 oparto na teście Bradforda (BioRad Laboratories Inc., Hercules, California, USA). Z powodu niestabilności dimeru A2 / B5 podczas SDS-PAGE, tworzenie dimeru zweryfikowano za pomocą analizy sieciowania. Oczyszczone kompleksy B5 i A2 sieciowano z zastosowaniem mM suberatu didukcynimidylowego (DSS) (Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois, USA) przez 30 minut, i reakcję zakończono przez dodanie M Tris-HCl, pH 7.4. Read more „Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy cd”

Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy ad

Specyficzne interakcje różnych par białek oceniano na podstawie aktywacji genu reporterowego GAL1-HIS3 w pożywce pozbawionej leucyny, tryptofanu i histydyny, ale w obecności 5 mM 3-aminotriazolu (13). Badano co najmniej 10 różnych kolonii wyrażających każdą parę białek fuzyjnych. Do analizy RT-PCR ekspresji mRNA A2 i B5, tkanki zebrano od 50-dniowych samców szczura Sprague-Dawley (Simonsen Laboratories Inc., Gilroy, California, USA). Całkowity mRNA ekstrahowano za pomocą odczynnika TRIzol (Life Technologies Inc., Grand Island, Nowy Jork, USA) przed RT uzyskując cDNA. Amplifikację PCR cDNA przeprowadzono w warunkach wysokiej ostrości (denaturacja: 94 ° C, 30 sekund, hybrydyzacja i wydłużanie: 68. Read more „Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy ad”

Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy

Ludzka tyreotropina (TSH), luteotropina (LH), folitropina (FSH) i gonadotropina kosmówkowa należą do heterodimerycznej rodziny hormonów glikoproteinowych. Wspólny. podjednostki tworzą niekowalencyjne heterodimery z różnymi. podjednostki. Ostatnio zidentyfikowano dwa nowe hormonopodobne geny ludzkich glikoprotein, a2 (A2) i A5 (B5). Read more „Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy”

Ocena aktywności choroby w dystrofiach mięśniowych za pomocą nieinwazyjnego obrazowania cd

Jako dodatkowe kontrole, wstrzyknięto myszom Dysf. /. / Pax7CreER / LuSEAP sam nośnik (olej kukurydziany) i nie znaleziono dowodów na ekspresję lucyferazy (Suplementowa Figura 4A). U myszy leczonych tamoksyfenem sygnał lucyferazy gwałtownie wzrastał w czasie w mięśniach kończyn tylnych szczepu z niedoborem dysferliny, ale nie w szczepie typu dzikiego (figura 2, B i C, i dodatkowa postać 4B). Ta zwiększona aktywność regeneracyjna u myszy z niedoborem dysferliny była widoczna już w wieku 3 miesięcy i wzrastała w sposób ciągły przez 18 miesięcy (fig. Read more „Ocena aktywności choroby w dystrofiach mięśniowych za pomocą nieinwazyjnego obrazowania cd”

Ocena aktywności choroby w dystrofiach mięśniowych za pomocą nieinwazyjnego obrazowania ad

W celu opracowania modelu mysiego do monitorowania regeneracji mięśni jako surogatu dla ciągłej aktywności choroby u myszy z dystrofiami mięśniowymi, użyto myszy Pax7CreER / LuSEAP, w których indukowana jest reaktywna wobec estrogenu rekombinaza Cre, aby trwale aktywować gen lucyferazy w mięśniach. komórki satelitarne (10). Aby scharakteryzować to. Reporter regeneracji. szczep, myszy najpierw obrazowano przed podaniem tamoksyfenu w celu określenia wyjściowego poziomu sygnału lucyferazy (dodatkowa postać 1, materiał uzupełniający dostępny online z tym artykułem; doi: 10,1172 / JCI68458DS1). Read more „Ocena aktywności choroby w dystrofiach mięśniowych za pomocą nieinwazyjnego obrazowania ad”

Ocena aktywności choroby w dystrofiach mięśniowych za pomocą nieinwazyjnego obrazowania

Dystrofie mięśniowe są klasą zaburzeń, które powodują postępujące wyniszczenie mięśni. Główną przeszkodą w odkrywaniu metod leczenia dystrofii mięśniowych jest brak wiarygodnych testów do monitorowania postępów choroby w modelach zwierzęcych. Opracowaliśmy nowy model myszy do nieinwazyjnego oceniania aktywności choroby u myszy z dystrofią mięśniową. Te myszy wyrażają indukowalny gen reporterowy lucyferazy w mięśniowych komórkach macierzystych. U myszy dystroficznych, komórki macierzyste mięśni aktywują się i proliferują w odpowiedzi na degenerację mięśni, co powoduje wzrost poziomu ekspresji lucyferazy, który można monitorować za pomocą nieinwazyjnego obrazowania bioluminescencyjnego. Read more „Ocena aktywności choroby w dystrofiach mięśniowych za pomocą nieinwazyjnego obrazowania”

Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy ad 7

Uważa się, że znane heterodimery hormonów glikoproteinowych są stabilizowane przez segment. podjednostka, która owija się wokół. podjednostka jak pas bezpieczeństwa (8). Jednak podjednostka B5 jest wyjątkowa, ponieważ nie zawiera wiązania dwusiarczkowego ważnego dla tworzenia pasów bezpieczeństwa. Rzeczywiście, niniejsza analiza wskazała, że heterodimer A2 / B5 jest mniej stabilny niż znane hormony glikoproteinowe podczas analizy SDS-PAGE. Read more „Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy ad 7”

Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy ad 6

Wartości ED50 dla A2 / B5 i bydlęcego TSH wynosiły odpowiednio 0,72 i 0,44 ng / ml. Przeciwnie, wartości ED50 dla ludzkich rekombinowanych i przysadkowych preparatów TSH wynosiły odpowiednio 4,05 i 6,26 ng / ml. Jednakże tyreostatimina była nieskuteczna w aktywacji receptorów LH lub FSH (Figura 4a, prawe panele). Ponadto, stymulujące działanie tyreostatiminy zostało zablokowane przez współtworzenie z surowicą odpornościową A2 lub B5 lub obydwoma z nich (Figura 4b). W teście receptora radioligandu opartym na znakowanym bydlęcym TSH i rekombinowanych ludzkich receptorach TSH (figura 4c), tyrostymulina skutecznie konkurowała o wiązanie receptora z wartością ED50 (32,5 ng / probówkę) porównywalną z tą dla bydlęcego TSH (28,5 ng / probówkę). Read more „Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy ad 6”

Nowe role śródbłonka limfatycznego w regulowaniu odporności adaptacyjnej

Nowe badania nad rolą komórek podścieliska w modulowaniu adaptacyjnych odpowiedzi immunologicznych obejmowały nowy nacisk na limfatyczne komórki śródbłonka (LEC). LEC są prawdopodobnie pierwszymi komórkami, które wchodzą w bezpośredni kontakt z obwodowymi antygenami, cytokinami, sygnałami niebezpiecznymi i komórkami odpornościowymi przemieszczającymi się z tkanek obwodowych do węzłów chłonnych. LEC mogą modulować funkcję komórek dendrytycznych, prezentować antygeny komórkom T w cząsteczkach MHC klasy I i MHC klasy II i wyrażać cytokiny i receptory immunomodulujące, co sugeruje, że ich rola w odporności adaptacyjnej jest znacznie szersza niż wcześniej sądzono. Przegląd ten podsumowuje pojawiające się dowody, że LEC są ważne w utrzymywaniu obwodowej tolerancji, ograniczaniu i rozwiązywaniu odpowiedzi komórek T efektorowych i modulowaniu funkcji leukocytów. Wprowadzenie Nasze uznanie dla różnorodnych funkcji naczyń limfatycznych ewoluowało z różnych dyscyplin naukowych. Read more „Nowe role śródbłonka limfatycznego w regulowaniu odporności adaptacyjnej”