Pdx1 przywraca funkcja komórek w myszach z nokautem Irs2 ad 5

Testy tolerancji glukozy u myszy w wieku 12 do 13 tygodni przeprowadzone z użyciem 2 g D-glukozy na kg masy ciała po 15 do 16-godzinnym poście. Wyniki zgłaszane jako średnie. SEM dla co najmniej ośmiu zwierząt na genotyp. * P <0,05 vs. typ dziki; ** P <0,01 vs. typ dziki; P <0,01, Irs2a / Pdx1tg vs. Irs2a / y. Chociaż promowane jest wyrażenie Pdx1tg. funkcja komórki w Irs2. /. myszy, nie miało to znaczącego wpływu na wrażliwość myszy typu dzikiego na egzogenne iniekcje insuliny i tylko nieznacznie przywróconą odpowiedź myszy Irs2a / Pdxltg na wstrzyknięcia insuliny (Figura 4c). Tolerancja glukozy w wieku 12-13 tygodni została znacząco poprawiona u myszy Irs2a / Pdxltg w porównaniu z Irs2a /. myszy; jednak tolerancja nie została całkowicie skorygowana, prawdopodobnie z powodu utrzymującej się obwodowej oporności na insulinę (Figura 4d). Irs2. /. u myszy rozwijają się różne zaburzenia, w tym upośledzenie wzrostu mózgu i siatkówki, i niepłodność u kobiet, i te wady utrzymują się u myszy Irs2a / Pdxltg, co sugeruje, że są one wynikiem rozregulowanej Irs2 sygnalizującej raczej przewlekłą hiperglikemię lub cukrzycę (M. Schubert i in. ., manuskrypt przedłożony do publikacji oraz odnośnik 18). Transgeniczna ekspresja Pdx1 miała głęboki wpływ na histologię Irs2. /. wysepki. W wieku 4-5 tygodni immunobarwienie insuliny i Pdx1 w Irs2. /. wysepki były konsekwentnie zmniejszone w porównaniu z myszami typu dzikiego (Figura 5). Przeciwnie, immunobarwienie insuliną i Pdx1 było niezmiennie silne u myszy Pdx1tg i Irs2a / Pdx1tg (Figura 5). Analiza morfometryczna przekrojów trzustkowych w wieku 4-5 tygodni i wieku 3 <4 miesięcy potwierdziła, że. zawartość komórek (w przybliżeniu przez średni obszar komórek. przekroju poprzecznego) była znacząco zmniejszona w Irs2a /. myszy (tabela 1). Wyrażenie Pdx1tg się nie zmieniło. zawartość komórek w dzikiej części trzustki, podczas gdy przywrócono ją. zawartość komórek w sekcjach Irs2a / Pdx1tg (tabela 1). Co więcej, wyrażenie Pdx1tg zwiększyło. komórka/. stosunek komórek w typie dzikim i Irs2. /. myszy, zwłaszcza w wieku 3. 4 miesięcy (Tabela 1). Mimo że . zawartość komórki w Irs2. /. skrawki zmniejszały się z wiekiem, liczba wykrytych wysepek była ledwo zmniejszona, a ekspresja Pdx1tg zachowała lub nieznacznie zwiększyła liczbę wysepek wykrytych w sekcjach trzustki (Tabela 1). Tak więc ekspresja Pdx1tg w znacznym stopniu przywraca morfologię wysepek w Irs2a /. myszy. Fig. 5 Morfologia morfologiczna samców myszy krzyżowych Irs2 + / Pddx1tg. Reprezentatywne wycinki trzustki z 4- do 5-tygodniowych myszy krzyżujących się Irs2 + / Pxd1g. (a) Barwienie hematoksyliną i eozyną (H & E) przy x 63. (b i c) Immunowe barwienie przeciwciałami przeciwko insulinie, sfotografowane w × 5 (b) i × 63 (c). (d) Immunowe barwienie przeciwciałami przeciwko Pdx1. (e) Immunowe barwienie przeciwciałami przeciwko insulinie (zielone) i glukagonowi (czerwone). Skala słupków, 50 .m. Tabela 1Morfometria osocza myszy krzyżowych Irs2 + / Pddxltg od wielkości. komórki nie były podatne na nieobecność Irs2 lub obecność Pdx1tg (Tabela 1), co zwiększyło. Zawartość komórek w Pdx1tg myszy trzustki może być związana, przynajmniej częściowo, ze zwiększoną mitogenezą. Mitogenezę oszacowano przez włączenie do 6 godzin BrdU na. komórki 2- do 3-tygodniowych samców myszy. Oznaczenie BrdU Irs2. /. . komórki zmniejszyły się o około 40% w porównaniu z myszami typu dzikiego, zgodnie z obniżeniem. zawartość komórki. Przeciwnie, znakowanie BrdU wzrosło dwukrotnie u myszy Pdx1tg i Irs2a / Pdx1tg (Figura 6). Zatem mitogeneza z udziałem Pdx1 może przyczynić się do zwiększenia. zawartość komórki w Irs2. /. myszy. Figura 6 Analiza włączenia BrdU dla męskiego potomstwa krzyżówki Irs2 + / P Pdx1tg w 2. 3 tygodniu życia. Wyniki są podawane jako procent BrdU-dodatni. komórki na genotyp, średnia. SEM. * P <0,05, Irs2a / Pdx1tg vs. Irs2a / y. Dyskusja Nasze wyniki pokazują, że progresywna utrata. funkcja komórek i początek cukrzycy w Irs2. /. myszy są związane ze zmniejszoną ekspresją w wyspach trzustkowych czynnika transkrypcyjnego homeodomenowej Pdx1 (zwanego również Idx-1 i Ipf1). PDX1 ma kluczowe znaczenie dla rozwoju trzustki u myszy i ludzi, a agenezja trzustki następuje po całkowitym zaburzeniu PDX1 (7, 19). Co więcej, PDX1 jest wymagany u dorosłych ludzi i myszy w celu promowania prawidłowego wykrywania glukozy i wydzielania insuliny (13, 15). Defekty genetyczne w genie PDX1 występują u około 5% osób z cukrzycą typu 2. Mutacje inaktywujące są związane z autosomalną cukrzycą o wczesnym początku (MODY), podczas gdy mutacje missense predysponują ludzi do późnej cukrzycy typu 2 (14, 20). Funkcjonalne połączenie sygnalizacji Irs2 i ekspresji Pdx1 obserwowane u myszy może wiązać się z cukrzycą typu 2 z autosomalnymi postaciami cukrzycy (MODY) [przypisy: operacje plastyczne dr szczyt, ostry dyzur okulistyczny, carcinoma adenoides cysticum ] [patrz też: finasteryd skutki uboczne, dom latających sztyletów cda, depilacja brazylijska poznań ]