Pdx1 przywraca funkcja komórek w myszach z nokautem Irs2 czesc 4

Jak można się było spodziewać, trzustka nie rozwinęła się u myszy pozbawionych Pdx1, w tym Irs2 + / Pdxl2 / /. i Irs2. /. Pdx1. /. myszy; jednak rozwinął się proporcjonalnie do wielkości ciała u innych myszy (dane nie pokazane). Przy urodzeniu, Irs2. /. Pdx + /. wysepki wyświetlane kilka i małe insulino-pozytywne. klastry komórkowe, w porównaniu z wysepkami o normalnej wielkości w myszach Irs2 (3 (3, Pdx1 + / i myszy typu dzikiego (Figura 3a). Immunobarwienie Pdx1 łatwo wykryto w wysepkach typu dzikiego, ale konsekwentnie redukowano w Pdx1 + / p. i w Irs2. /. wysepki; i było prawie niewykryte w Irs2. /. Pdx1 + /. wysepki, zgodne z ciężką hiperglikemią, która rozwinęła się po urodzeniu (Figura 3a). Figura 3Morfologia i oznaczenie ilościowe w komórkach z Irs2 + / Pddxl + / y. między myszami krzyżowymi i testami tolerancji glukozy u dorosłych Irs2 + / Pdxl + /. myszy intercross. (a) Reprezentatywna morfologia wysepek trzustkowych noworodków Irs2 + / P Pdx1 + /. Szczenięta międzykomórkowe są wybarwione immunologicznie przeciwciałami przeciwko insulinie (zielone) i glukagonem (czerwone, górne panele), insuliną (zielone, środkowe panele) i Pdx1 (czerwone, dolne panele). Skala słupków, 50 .m. (b) . Obszar komórek nowonarodzonego potomstwa płci męskiej i żeńskiej z Irs2 + / Pdxl + /. krzyżówki międzykomórkowe (średnia . SEM w stosunku do całkowitej powierzchni trzustki). Irs2. /. Pdx1 + /. szczeniaki zmniejszyły się. obszar komórek w porównaniu z dzikim typem, Irs2a / P, lub Pdx1 + / P (* P <0,05, P <0,01). (c) Analiza morfometryczna przekrojów trzustki 3- do 4-miesięcznego męskiego potomstwa z Irs2 + / Pdxl + /. intercross. Wyniki są podane jako średnie. SEM z. obszar komórek (procent w stosunku do całkowitej powierzchni trzustki). Po 3. 4 miesiącach, Irs2 + /. Pdx1 + /. myszy zmniejszyły się. obszar komórek w porównaniu z typem dzikim (** P <0,01) lub Pdx1 + /. (P <0,01). (d) Testy tolerancji glukozy u 7- do 8-tygodniowych myszy z 2 g D-glukozy na kg masy ciała po 15 do 16-godzinnym głodzie (typ dziki, n = 6; Irs2 + / ., n = 11, Pdxl + / a, n = 9, Irs2 + / P Pdxl + / a, n = 11, Irs2 + / P Pdxl + / a, n = 17, Irs2a / a, n = 4). Wyniki są podane jako średnie. SEM. * P <0,05, Irs2 + / Pdxl + /. vs. Pdx1 + / .; ** P <0,01, Irs2 + / Pdxl + /. vs. Pdx1 + / .. . Zawartość komórek oznaczono ilościowo u różnych myszy przez oszacowanie obszaru dodatniego pod względem insuliny w wielu przekrojach trzustkowych. W porównaniu z myszami typu dzikiego,. zawartość komórek była nieznacznie zwiększona u noworodków Irs2 + /. myszy i nieznacznie zmniejszyła się w Pdx1 + / P, Pdx1 + / P irs2 + / P i Irs2 A / p myszy; jednak te niewielkie zmiany nie osiągnęły istotności statystycznej (rysunek 3b). Natomiast. zawartość komórek była znacząco zmniejszona w odcinkach trzustkowych noworodków Irs2a / Pdx + / y. myszy (P <0,05), zgodne z wystąpieniem hiperglikemii śmiertelnej 4 dni po urodzeniu (Figura 3b). Do 3. 4 miesiąca życia,. zawartość komórek była podobna w Irs2 + / ., typu dzikiego i Pdx1 + /. myszy (Figura 3c); jednak, . zawartość komórek została zmniejszona o 75% w heterozygotycznym związku Irs2 + / P Pdx1 + / p myszy, co sugeruje, że zarówno Irs2, jak i Pdx1 przyczyniają się do prawidłowej funkcji wysepek (Figura 3c). W konsekwencji, Irs2 + / Pdxl + /. u myszy wystąpiła ostra nietolerancja glukozy niż u mniej dotkniętych nią dzieci w wieku 7. 8 tygodni (Figura 3d). Aby sprawdzić, czy Pdx1 promuje normalne funkcjonowanie Irs2. /. . komórki, przekroczyliśmy Irs2 + /. myszy z myszami Pdx1tg w celu zwiększenia dawki genu Pdx1 w Irs2. /. myszy. Jak wcześniej opisano, myszy Pdx1tg mają wiele kopii szczurzego cDNA Pdx1 kontrolowanego przez promotor Pdx1 szczura, co powoduje około trzykrotną nadekspresję Pdx1 w odpowiednich miejscach i etapach rozwojowych (16). Przypadkowe poziomy glukozy i insuliny były identyczne u myszy typu dzikiego i Pdx1tg (Figura 4, aib). Zadziwiająco, ekspresja Pdx1tg zapobiegła hiperglikemii i względnej hipoinsulinemii, która rozwinęła się w Irs2. /. myszy podczas pierwszych 12-13 tygodni życia (Figura 4, aib). Ponadto, myszy Irs2a / Pdx1tg przeżyły z prawie normalnym poziomem glukozy i insuliny przez okres do 16 miesięcy; teraz mamy myszy Irs2 (3 / Pdx1tg, które przeżyły z łagodną nietolerancją glukozy przez okres do 20 miesięcy. Na podstawie tych wyników przywrócono ekspresję Pdx1tg. funkcja komórki w Irs2. /. myszy i zapobiegał rozwojowi cukrzycy. Figura 4 Charakteryzacja męskiego potomstwa krzyżówki Irs2 + / Pxd1tg. (aib) Fałszywy glukoza we krwi (a) i insulina (b) Irs2 + / P Pdx1tg w poprzek myszy w 4-5 tygodniu, 12-13 tygodni i 12-16 miesięcy. Wyniki są średnie. SEM sześciu myszy na genotyp. * P <0,05, Irs2. /. vs. typ dziki; ** P <0,01, Irs2. /. vs. typ dziki; P <0,05, Irs2a / Pdxltg vs. Irs2a / r; P <0,01, Irs2a / Pdx1tg vs. Irs2a / y. (c) Test na tolerancję insuliny u myszy karmionych od 4 do 5 tygodni, z użyciem 0,75 j./kg ludzkiej insuliny zwykłej na karmionych zwierzętach. Wyniki wyrażono jako średnie. SEM procentowej początkowej wartości stężenia glukozy we krwi dla co najmniej ośmiu zwierząt na genotyp [patrz też: centrum pszczelarskie łysoń, płatki owsiane na wodzie, wieniec zdrój sanatorium hutnik ] [hasła pokrewne: klinika stomatologiczna łódź, carcinoma adenoides cysticum, operacje plastyczne dr szczyt ]