Rola mediatora wnikania wirusa opryszczki jako negatywnego regulatora odpowiedzi pośredniczonych przez limfocyty T czesc 4

HVEM. /. myszy wykazywały znacząco wyższe i przedłużone poziomy cytokin w surowicy pomiędzy 2 a 6 godziną po traktowaniu ConA. Takie wysokie i przedłużone poziomy cytokin mogą przyczyniać się do zwiększonej zachorowalności i śmiertelności w HVEM. /. myszy (18, 19). Dlatego nasze dane in vitro i in vivo razem wskazują, że HVEM. /. Komórki T mogą być bardziej aktywne w generowaniu cytokin w odpowiedzi na stymulację ConA. Figura 5 Podawanie ConA zwiększa cytokiny w surowicy w HVEMa / l. myszy. Surowice z myszy WT i KO zebrano w 2 i 6 godzin po podaniu ConA. TNF, IFN, IL-6 i IL-2 w surowicach oznaczono metodą sandwich ELISA, a statystycznie istotne różnice wykazano we wszystkich grupach po 2 i 6 godzinach. Komórki CD4 + były odpowiedzialne za nadreaktywność. Produkcja cytokin zależnych od ConA zależy od interakcji między limfocytami T CD4 + a komórkami NKT (20). Wczesna produkcja cytokin w HVEM . /. Komórki T można w większości przypisać komórkom CD4 +, które obejmują zarówno NK1.1 +, jak i NK1.1. Populacje komórek T. Aby przetestować tę możliwość, grupa HVEM. /. myszy leczono 100 .g mAb anty-CD4 dzień przed podaniem ConA w celu depozycji limfocytów T CD4 +. Po leczeniu ConA, HVEM. /. myszy były chore i umierały przez 6. 8 godzin, podczas gdy zubożone w CD4 HVEM. /. myszy nie wykazywały objawów choroby przez dłużej niż 48 godzin. Surowce cytokin z WT, HVEM p / a, i zubożone w komórki T CD4 + z HVEM p / r. myszy zostały zmierzone. Co ciekawe, zjawisko wzrostu cytokin w HVEM. /. myszy po stymulacji ConA zmniejszono w HVEM . zubożonym w CD4. /. myszy, które sugerowały, że limfocyty T CD4 + są niezbędnym źródłem dla szybko podwyższonych cytokin w HVEM p /. myszy (Figura 6). Podsumowując, wyniki te sugerują, że limfocyty T CD4 + są niezbędne do zwiększonej produkcji cytokin w HVEM p / P. myszy w odpowiedzi na leczenie ConA. Figura 6CD4 + komórki T są wymagane do wytwarzania większej ilości cytokin w HVEMa /. myszy. W celu usunięcia limfocytów T CD4 +, 100 .g / mysie mAb anty-CD4 wstrzyknięto ip do HVEMa / l. myszy (n = 5). Surowice zebrano od 5 myszy na grupę 4. 5 godzin później, a IFN, TNF i IL-2 określono w teście z użyciem kulek cytokinowych. Deplecja komórek CD4 + znacząco zmniejszyła poziomy cytokin (P <0,05 dla IFN i TNF; P <0,01 dla IL-2). Zwiększona podatność na rozwój doświadczalnej encefalopatii autoimmunologicznej w HVEM. /. myszy. Aby ocenić, czy HVEM. /. myszy były bardziej podatne na rozwój chorób autoimmunologicznych, w których pośredniczą komórki T, takie jak doświadczalna autoimmunologiczna encefalopatia (EAE), WT i HVEMa /. myszy immunizowano peptydem MOG zemulgowanym w CFA. Co ciekawe, wyniki pokazały, że HVEM. /. myszy rozwijały EAE wcześniej i przez dłuższy czas w porównaniu do myszy WT (Figura 7A). Odzyskiwanie z choroby nie było obserwowane w większości HVEM. /. myszy do 32 dni po wystąpieniu choroby, podczas gdy myszy WT odzyskały znacznie wcześniej. Aby zająć się kwestią, czy zwiększona powaga EAE w HVEM. /. myszy były związane ze zwiększoną odpowiedzią limfocytów T na antygen, komórki drenujące węzeł chłonny (DLN) izolowano od myszy z ekspresją 20 dni po immunizacji sc peptydem MOG35 (bez toksyny) i ponownie stymulowano peptydem MOG35 (55 w Vitro. Komórki DLN z HVEM. /. myszy mnożyły się bardziej niż z WN DLN (Figura 7B) i wytworzyły wyższe poziomy TNF-a i IFN-y (Figura 7C). Częstotliwość limfocytów T specyficznych względem antygenu w komórkach DLN primerów HVEM a /. u myszy była znacznie wyższa niż u myszy WT, co określono za pomocą ELISPOT (Figura 7D). Wyniki te wskazują, że HVEM. /. myszy były bardziej podatne na rozwój autoimmunologicznego EAE, co dodatkowo potwierdza, że HVEM negatywnie regulował komórki T in vivo. Rysunek 7 Zwiększona podatność na rozwój EAE w HVEM. /. myszy. Rozwój EAE indukowano u myszy WT i HVEM . /. myszy jak opisano w Methods. (A) Myszy obserwowano codziennie i punktowano. Pokazano średnią ocenę kliniczną w funkcji czasu. Testowano pięć myszy na grupę. (B. D) Silniejsze specyficzne dla MOG odpowiedzi komórek T wykrywa się w HVEM p /. myszy. Myszy immunizowano sc 100 .g MOG35-55 zemulgowanego w CFA (bez toksyny). Dziesięć dni później komórki DLN z myszy wyizolowano i hodowano z różnymi stężeniami peptydu MOG35 (3 w kompletnej pożywce RPMI-1640 przez 5 dni w celu analizy proliferacji (B). Silniejsze odpowiedzi wykrywano w komórkach z HVEMa / /. grupa w stężeniach 1, 5 i 25 .g (P <0,05). Liczbę komórek wytwarzających IFN określono za pomocą ELISPOT (C). Komórki wytwarzające wyższe poziomy IFN wykryto w HVEMa / | myszy (P <0,001). Komórki DLN stymulowano antygenami przez noc do ELISPOT w celu określenia częstości komórek T specyficznych dla antygenu (D) [podobne: przeszczep szpiku kostnego, depilacja brazylijska poznań, wrzodziejące zapalenie jelita grubego dieta ] [przypisy: sprzęt pszczelarski łysoń, centrum pszczelarskie łysoń, sklep pszczelarski łysoń ]