Sumoilated HSP90 jest dominującym czynnikiem dziedziczącym ryzyko dyssypcji komórek plazmatycznych cd

Oznaczenie miana paraproteiny i rekombinowanego BCR. Ekspresja HSP90-SUMO1 w komórkach krwi obwodowej. Chociaż nie wykryto HSP90-SUMO1 w żadnej izolowanej subpopulacji komórek PBMC z nośników WT HSP90, białe krwinki z nośników HSP90-SUMO1 eksprymowały obie formy HSP90. Komórki B od nosicieli HSP90-SUMO1 wyrażały więcej HSP90-SUMO1 niż WT HSP90, podczas gdy WT HSP90 był dominującą postacią we wszystkich innych subpopulacjach komórek krwi. Ponadto, w wymazach z jamy ustnej od nosicieli HSP90-SUMO1 wykryto tylko WT HSP90, podczas gdy HSP90-SUMO1 był nieobecny. Linie komórek limfoblastoidalnych transformowanych EBV (LCL) od nosicieli HSP90-SUMO1 eksprymowały oba warianty HSP90 przez cały okres ich życia w hodowli (testowane od pasaży do 50, Suplementowa Figura 4), podczas gdy tylko WT HSP90 wyrażano w LCL pochodzących z WT HSP90 przewoźnicy. HSP90-SUMO1 w innych nowotworach złośliwych i chorobach autoimmunologicznych. U wszystkich europejskich pacjentów z innymi typami raka i chorobami autoimmunologicznymi stwierdziliśmy występowanie HSP90-SUMO1 podobnie jak u zdrowych osób z grupy kontrolnej (Tabele dodatkowe 2 i 3), co wskazuje, że stan nośnika HSP90-SUMO1 i immunoreaktywność przeciw tej potranslacyjnej modyfikacji są zwiększone. tylko u pacjentów z MM / MGUS / WM. Dziedziczenie HSP90-SUMO1. Członkowie 3 rodzin z pacjentami, którzy nosili i posiadali paraproteiny swoiste wobec HSP90-SUMO1 w surowicy, wyrazili pisemną zgodę na badanie pod kątem stanu nośnika HSP90-SUMO1. We wszystkich tych rodzinach analiza wykazała, że sumoilowany stan nośnika HSP90 jest dziedziczony w sposób dominujący autosomalnie (fig. 4 i suplementowa figura 5). Rycina 4 Rodowód rodziny z pacjentem z MM i HSP90-SUMO1 jako grupą kontrolną. Pokazano rodowód rodziny i Western blot dla stanu HSP90. Sumoilowany HSP90 wykryto u pacjentki z MM iw jej zdrowej siostrze. Każda z 2 sióstr miała dwoje dzieci, z których jedna była nosicielką HSP90-SUMO1, podczas gdy druga nie. Wszystkie dzieci były zdrowe. Regulacja HSP90-SUMO1 u pacjentów. Obserwacja, że HSP90-SUMO1 wykryto tylko u pacjentów, ale nie u osób zdrowych, podniosła kwestię enzymów odpowiedzialnych za sumoilację i desumoilację HSP90. Doświadczenia z dopełnianiem z zastosowaniem natywnych ekstraktów enzymatycznych pochodzących z krwi pacjentów i osób zdrowych wykazały, że desumoilacja, ale nie sumoilacja, HSP90-SUMO1 była (częściowo) nieaktywna u pacjentów (Figura 5A). W doświadczeniach knockdown stosowano LCL, ponieważ LCL utrzymują stan nośnika dawcy, z którego są ustalone. Doświadczenia knockdown z wykorzystaniem specyficznych dla SUMP specyficznych dla SUMP specyficznych dla proteazy swoistych (swoistych wobec SENP) shRNA w LCL pochodzących od osób zdrowych zidentyfikowały SENP2 jako odpowiedzialny za desumoilację HSP90-SUMO1 u zdrowych ludzi, podczas gdy hamowanie innych SENP nie miało wpływu na HSP90-SUMO1. Wynik ten został potwierdzony przez inkubację rekombinowanego HSP90-SUMO1 wraz z rekombinowanymi SENP: tylko SENP2, ale żaden z innych SENP, nie rozszczepił HSP90-SUMO1, potwierdzając, że (specyficzna) niezdolność SENP2 do desumoilacji HSP90-SUMO1 była odpowiedzialna za HSP90- SUMO1 (rysunek 5, B i C). Nie wykryto modyfikacji DNA ani różnic w ekspresji SENP2 na poziomie mRNA i białka (dodatkowa figura 6); podobnie, nie wykryto podwyższenia lub obniżenia aktywności innych enzymów sumoilujących lub dezumoilujących (dodatkowa Figura 7). Aby przetestować komórki pochodzące od pacjenta pod kątem aktywności SENP2, enzymy SENP2 od pacjentów. PBMC i zdrowe kontrole zostały wzbogacone o chromatografię immunopowinowactwa i przetestowane pod kątem ich zdolności do cięcia substratu wskaźnikowego RanGAP. RanGAP został rozszczepiony przez SENP2 pochodzący od pacjentów i zdrowych dawców (Figura 6), wskazując, że pacjenci nie wykazywali ogólnej wady aktywności enzymu SENP2. Figura 5 Regulacja HSP90-SUMO1 u pacjentów. (A) Test komplementacji. Przygotowano ekstrakty komórek natywnych ze świeżej krwi pacjenta przenoszącego HSP90-SUMO1 (P296) i zdrowego dawcy (GS7), stosowano do komplementacji i analizowano metodą Western blot i immunodetekcję z użyciem mAb anty-HSP90. Górny prążek reprezentuje HSP90-SUMO1, niższy HSP90. HSP90-SUMO1 strawiono natywnym ekstraktem enzymu pochodzącym od zdrowego dawcy, podczas gdy natywne enzymy pochodzące od pacjenta nie uległy rozszczepieniu. Ścieżki a3: ekstrakt z komórek PBMC zdrowej krwi dawcy; ścieżki 4. 6: ekstrakt z komórek PBMC krwi pacjenta. Ścieżki i 4: ekstrakt plus PBS jako kontrola; ścieżki 2 i 5: ekstrakt plus zdrowy ekstrakt natywnego enzymu; ścieżki 3 i 6: ekstrakt plus pacjenci. natywny ekstrakt enzymu
[podobne: wrzodziejące zapalenie jelita grubego dieta, objawy refluksu u dzieci, klinika stomatologiczna łódź ]
[przypisy: ostry dyzur okulistyczny, klinika stomatologiczna łódź, carcinoma adenoides cysticum ]