Sumoilated HSP90 jest dominującym czynnikiem dziedziczącym ryzyko dyssypcji komórek plazmatycznych czesc 4

Desumoilacja HSP90-SUMO1. LCL pochodzące od zdrowego dawcy (po lewej) lub od pacjenta (po prawej) i transformowane shRNA swoistymi dla poszczególnych SENP sprawdzano pod względem HSP90 metodą Western blot i immunodetekcję z użyciem mAb anty-HSP90. HSP90-SUMO1 był wykrywalny tylko wtedy, gdy SENP2 był zahamowany. Ścieżka 1: inkubacja z zaszyfrowanym shRNA; ścieżki 2. 5: inkubacja z shRNA versus SENP1 (linia 2), SENP2 (linia 3), SENP3 (linia 4) i SENP5 (linia 5). (C) Inkubacja oczyszczonego rekombinowanego WT HSP90 (po lewej) lub HSP90-SUMO1 (po prawej) z oczyszczonymi rekombinowanymi SENP. Analizę przeprowadzono metodą Western blot i immunodetekcję z użyciem anty-HSP90 lub anty-SUMO1. Tylko SENP2 odciął HSP90-SUMO1, podczas gdy inne SENP nie. Ścieżka 1: brak SENP; ścieżka 2: SENP1; ścieżka 3: SENP2; ścieżka 4: SENP3. Figura 6 Aktywność SENP2 w PBMC pochodzenia pacjenta. Enzymy SENP2 pochodzące z PBMC pacjenta i zdrowego dawcy oczyszczono metodą chromatografii powinowactwa i inkubowano z GST-RanGAP-SUMO1. Analizę przeprowadzono metodą Western blotting i immunodetekcję z użyciem mAb GST. Desumoilację wykryto dla obu preparatów, co wskazuje na aktywny enzym SENP2 u pacjentów i zdrowych osób z grupy kontrolnej. (A) Izolacja SENP2 z PBMC. Wykrywanie przeprowadzono metodą Western blot przy użyciu anty-SENP2. Ścieżki 1. 3: zdrowych dawców; ścieżki 4. 6: pacjent. Ścieżki i 4: lizat; ścieżki 2 i 5: przepływ przez; ścieżki 3 i 6: eluat. (B) Test na aktywność SENP2. Wykrywanie przeprowadzono za pomocą Western blot stosując anty-GST. Ścieżka 1: GST-RanGAP jako kontrola; ścieżka 2: GST-RanGAP plus SENP2 pochodzący od pacjenta; ścieżka 3: GST-RanGAP plus SENP2 od zdrowych dawców. Górny prążek przedstawia GST-RanGAP-SUMO1, niższy GST-RanGAP. Dyskusja Potranslacyjna modyfikacja białek została zidentyfikowana jako cele autoimmunogenne w szerokim spektrum chorób autoimmunologicznych, np. Antygenów jądrowych w układowym toczniu rumieniowatym (SLE), cytrulinowanej wimentyny w reumatoidalnym zapaleniu stawów (7) i glikoproteiny związanej z mieliną w przewlekłej zapalnej polekropatii demielinizacyjnej ( 8, 9); Potranslacyjnie zmodyfikowane autoantygenetyczne cele BCR w nowotworach z komórek B opisano dla przewlekłej białaczki limfatycznej (CLL) (utleniony LDL, odnośnik 10) i MGUS / MM / WM (hiperfosforylowane paratargi) (2, 4, 6). Hiperfosforylowane paratargi wykrywano przy użyciu niezmodyfikowanych makromacierzy białkowych, ponieważ odpowiednie paraproteiny reagowały zarówno z natywnym białkiem na makromacierzy, jak i wariantem hiperfosforylowanym. Aby nie ominąć posttranslacyjnie zmodyfikowanych celów paraprotein, które nie reagują krzyżowo z natywnym lub białkiem WT, poddaliśmy komercyjnie dostępne makromacierze białkowe sumoilacji in vitro, dzięki czemu udało się zidentyfikować HSP90-SUMO1 jako częsty cel paraprotein z MGUS / MM / Pacjenci z MW. Fakt, że reakcja odpowiednich paraprotein była specyficzna dla sumoilowanego HSP90, podczas gdy WT HSP90 lub SUMO1 nie wykazywały żadnej reakcji, sugerował, że region rozgałęzienia białka HSP90, który łączy HSP90 i SUMO1, może być epitopem wiążącym odpowiednie paraproteiny. Wykonując mutagenezę ukierunkowaną, zidentyfikowaliśmy lizynę w pozycji 559 HSP90 (K559) jako miejsce sumoilacji i część epitopu wiążącego paraproteinę. Po wykazaniu, że sumoilacja HSP90 przy lizynie 559 jest dziedziczona w sposób autosomalny dominujący, interesujące było sprawdzenie występowania u pacjentów z MGUS / MM specyficznych paraprotein HSP90-SUMO1 . i rozpowszechnienie zdrowych nosicieli HSP90-SUMO1 w różnych grupach etnicznych. grupy. Ponieważ stan nosicielski HSP90-SUMO1 występuje rzadko w zdrowych grupach kontrolnych ze wszystkich 3 badanych grup etnicznych, nosiciele tego wariantu są znacznie bardziej narażeni na MGUS / MM / WM, a ORs w zakresie od 6,2 w Afroamerykanach i 7,4 w języku japońskim do 14,8 u europejskich nosicieli wariantu sumoilowanego, czyniąc z HSP90-SUMO1 drugi najsilniejszy czynnik ryzyka po hiperfosforylowanej paratarg-7 dla MGUS / MM / WM we wszystkich 3 grupach etnicznych. Ponieważ grupa kontrolna (mediana wieku 40 lat) była o 26 lat młodsza niż pacjenci z paraproteinami (66 lat), nie można wykluczyć, że zdrowi nosiciele rozwiną specyficzny paraprotein anty-HSP90-SUMO1 . z dłuższym okresem obserwacji. Jednak gdyby tak było, zwiększyłoby to tylko OR u zdrowych nosicieli. Testowanie stanu nośnika HSP90-SUMO1 może identyfikować i wykluczać członków odpowiednich rodzin, u których występuje zwiększone ryzyko rozwinięcia MGUS lub MM, co może być pomocne w sytuacji klinicznej. Białka SUMO to rodzina małych białek, które wiążą się kowalencyjnie z resztami aminokwasowymi białek docelowych w celu zmodyfikowania ich funkcji (11. 13)
[hasła pokrewne: sklep pszczelarski łysoń, dom latających sztyletów cda, sklep łysoń ]
[patrz też: operacje plastyczne dr szczyt, finasteryd skutki uboczne, dom latających sztyletów cda ]