Trostostymina, heterodimer dwóch nowych ludzkich podjednostek hormonu glikoproteinowego, aktywuje receptor hormonu tarczycy

Ludzka tyreotropina (TSH), luteotropina (LH), folitropina (FSH) i gonadotropina kosmówkowa należą do heterodimerycznej rodziny hormonów glikoproteinowych. Wspólny. podjednostki tworzą niekowalencyjne heterodimery z różnymi. podjednostki. Ostatnio zidentyfikowano dwa nowe hormonopodobne geny ludzkich glikoprotein, a2 (A2) i A5 (B5). Przy użyciu dwuhybrydowego testu drożdżowego dwie podjednostki znaleziono jako potencjalnych partnerów heterodimeryzacji. Analizy immunologiczne potwierdziły heterodimeryzację A2 i B5 w transfekowanych komórkach i ich kolokalizację w przednim płacie przysadki. Rekombinowane heterodimeryczne glikoproteiny A2 / B5, oczyszczone przy użyciu chromatografii kationowymiennej i frakcjonowanej, aktywowane ludzkie receptory TSH, ale nie receptory LH i FSH, i wykazywały wysokie powinowactwo do receptorów TSH w teście receptora radioligandu. Heterodimer stymulował również wytwarzanie cAMP i włączanie tymidyny przez hodowane komórki tarczycy i zwiększał poziom tyroksyny w surowicy u szczurów z supresją TSH in vivo. Ten nowy heterodimeryczny hormon glikoproteiny został nazwany tyrostatimuliną w oparciu o jej aktywność stymulującą tarczycę. Ekspresja tyreostatiminy w przednim płacie przysadki znanym z ekspresji receptorów TSH sugeruje mechanizm parakrynny. Obecne odkrycie nowego ligandu opartego na podejściach genomowych może ułatwić zrozumienie fizjologicznej roli pozatarczycowego układu receptora TSH oraz strukturalno-funkcjonalnych podstaw przekazywania sygnałów przez powiązane hormony glikoproteinowe. Wprowadzenie Ludzka tyreotropina (TSH), folitropina (FSH), lutropina (LH) i gonadotropina kosmówkowa (CG) są członkami rodziny hormonów glikoproteinowych otrzymywanych z heterodimeryzacji związku pospolitego. podjednostka specyficzna dla hormonów. podjednostki. Hormony te zostały pierwotnie oczyszczone z przedniego płata przysadki (TSH, LH i FSH) i łożyska (ludzkiego CG) i wykazano, że aktywują specyficzne sprzężone z białkiem G receptory w tarczycy (receptor TSH) i gonady (receptory LH i FSH), odpowiednio (1. 4). Te trzy hormony glikoproteinowe pochodzące z przysadki mózgowej stanowią podstawę klasycznych systemów przysadkowego przysadkowego i są niezbędne do rozwoju i różnicowania tkanek tarczycy i gonad. W szczególności, TSH jest niezbędna do produkcji jodotronin przez tarczycę, a zaburzenia osi przysadki-tarczycy i gruczołu tarczowo-tarczycy prowadzą do zaburzeń zasadniczo wszystkich szlaków metabolicznych i narządów (5, 6). W oparciu o przeszukiwania GenBank zidentyfikowaliśmy dwa dodatkowe geny podjednostkowe hormonu ludzkiego glikoproteiny i nazwaliśmy je a2 (A2) i a5 (B5), ze względu na ich strukturalne podobieństwa do znanych podjednostek i chronologię odkrycia (7). (Numery akcesyjne dla GenBank dla A2 i B5 to odpowiednio AF403384 i AF403430). A2 i B5 mają konserwowane reszty cysteiny, podobne do tych występujących w dobrze scharakteryzowanych. i . podjednostki (8, 9) ważne dla tworzenia kluczowych wiązań dwusiarczkowych. Podobnie jak wszystkie inne podjednostki hormonów glikoproteinowych, A2 i B5 mają unikalną strukturę węzła cystynowego charakterystyczną dla białek związanych z TGF-y, PDGF i rodzinami białek morfogenetycznych kości (10, 11). Ponieważ domniemana podjednostka A2 może łączyć się ze znaną lub nową powieścią. podjednostki do otrzymania bioaktywnych heterodimerycznych hormonów, przeprowadziliśmy drożdżowy dwuhybrydowy test interakcji białko-białko w celu zidentyfikowania potencjalnych partnerów dimeryzacji dla A2 i stwierdziliśmy interakcje między A2 i B5. Wygenerowaliśmy Ab przeciwko A2 i B5, aby potwierdzić interakcje między tymi przypuszczalnymi podjednostkami i ich kolokalizacją w przednim płacie przysadki. Po testach aktywacji receptorów hormonów glikoproteinowych stwierdzono, że heterodimer A2 / B5 stymuluje receptory TSH, ale nie gonadotropinowe in vitro i in vivo. Obecne podejście dostarcza nowego paradygmatu do odkrywania heterodimerycznych ligandów polipeptydowych o małej obfitości z zastosowaniem metod dopasowywania bioinformatycznego, drożdżowego dwuhybrydowego i ligand-receptor. Metody Drożdżowe testy dwuhybrydowe i RT-PCR. Interakcje między A2 i różnymi podjednostkami hormonów glikoproteinowych oceniano w drożdżowym systemie dwuhybrydowym z wykorzystaniem domeny wiążącej GAL4 pGBT9 i wektorów aktywacji GAL4 pGADGH (AD) 12. Specyficzne wiązanie różnych par białek oceniano na podstawie aktywacji genów reporterowych GAL1-HIS3 i GAL4-lacZ (Clontech Laboratories Inc., Palo Alto, California, USA). Dojrzały region ludzkiego cDNA A2 poddano fuzji z GAL4-AD w drożdżowym wektorze wahadłowym, pGADGH. Podobnie, cDNA kodujące inne podjednostki hormonu glikoproteiny bez peptydów sygnałowych poddano fuzji z GAL-4 (3 BD wektora pGBT9.
[przypisy: płatki owsiane na wodzie, operacje plastyczne dr szczyt, łysoń sklep ]
[podobne: sklep pszczelarski łysoń, bartnik bielsko, przychodnia bielsko komorowicka ]